一个六岁去势雄性秋田犬呈现出长达一年持续多尿、烦渴症状,对抗生素(阿莫西林)治疗无反应。患犬很难检查,在腹部触诊时表现痛苦。超声成像显示膀胱壁弥漫性增厚。通过膀胱穿刺收集的尿液样本被提交用于尿检和细胞学的评估。尿分析结果和细胞学镜检(尿液沉积物离心后涂片)提供如下。
尿检结果
测试
结果
单位
体积
2
mL
颜色
中黄
浊度
轻微浑浊
比重
1.
pH
8.0
蛋白
15(微量)
mg/dL
亚铁血红素
1+
红细胞
5-20
/高倍镜值
白细胞
5
/高倍镜值
细菌
没看到
上皮细胞
没看到
精子
没看到
根据镜检结果,考虑下面的问题:
·解释验尿的结果。
识别在图1标记的细胞。
·病原体明显吗?
·尿上所注明的其他检查是什么?
图1尿液沉积物离心后涂片(赖特染色)
诊断
支原体感染引起的化脓性炎症败血症
病例解析
尿分析揭示,脓尿(太多的白细胞/高境值,伴随着5白细胞/高境值成为了它的“正常值”),碱性尿,和微量蛋白尿。膀胱穿刺样品增加的白细胞的数量的存在表明炎症的源头位于膀胱、输尿管和肾脏。在这种情况下,基于超声检查膀胱壁增厚,膀胱炎被怀疑。由于上皮细胞和白细胞尿液浑浊。虽然尿不是很浓缩,狗没有脱水,使得它难以解释尿比重的结果。这个值的尿比重并不表明肾脏疾病的存在,除非狗同时有氮血症且没有其他因素干扰尿液浓缩能力(如髓溶质冲刷)。不幸的是,生化结果不可用,但没有临床怀疑这个病人的肾脏有疾病(肾脏疾病仍不能排除)。多尿、烦渴表明肾脏疾病可能会同时存在,但是还有其他的原因引起这些临床现象,可能是叫pollakuria的肾脏疾病(增加排尿的频率)被误认为是多尿症,增加排尿量。蛋白尿的程度是边缘型的(可能是由于过度尿比重)。在个案例中,这可以归因于脓尿(由于血浆蛋白分泌到尿液的炎症),但是潜在的肾脏疾病(管状或肾小球)不能被排除。请注意,蛋白试纸阳性反应不应归因于白细胞或上皮细胞本身的蛋白质。碱性尿液可能是继发于由含脲酶细菌引起的尿素水解(例如脲原体)。尿液pH值也可能是碱性,如果样本收集于餐后(饭后碱潮)。血红素的阳性反应可以归因于尿液中的少量红细胞(试纸很敏感)。红细胞可能继发于膀胱穿刺过程(数字并不过度)。也可能因微生物过氧化物酶活性引起虚假的增加(问题1)。
离心后的的尿液样本是高细胞的包含炎症细胞和上皮细胞。中性粒细胞是最多的炎性细胞(细胞“C”,问题2,图1)且表现出轻度退化。中性粒细胞的退化的外表可能继发于尿由于细胞或并发细菌感染的“有毒”环境。低数量的嗜酸性粒细胞(细胞“B”,问题2,图1)和有液泡的巨噬细胞(暗示一些慢性感染)也被标注。低到中等数量的个别的圆与中度到高核多面上皮细胞胞质比率被确定(细胞“A”,问题2,图1)。这些细胞中有紫色的细胞质和起泡的细胞核染色质和核仁。红细胞大小不均和细胞核大小不均处于轻度至中度且罕见的有双细胞核的形式出现。这被解释为由于炎症引起的发育不良的或增生性反应。中性粒细胞常常含有非特异性吞噬的碎片,以及轻沾球菌样的环形细菌(0.51μm)在他们的细胞质(图2-4)。背景也包含大量类似的形状和大小的细菌(问题3)和适量的红细胞。细菌细胞学的特性是典型的支原体科的。这些生物是太小了而不能在常规尿液被识别(湿法制备尿沉积物)。
图2尿沉渣(标记的)
图3球形细菌和上皮细胞
支原体科种属
病情跟进
常规尿培养结果是阴性的。然而,由于细胞学的分析怀疑存在支原体或脲原体,要求了一个对这些生物特定的培养(问题4)。特别支原体介质的培养显示了一个纯支原体的生长,并没有进一步形成物种。不幸的是,没有有效跟进这个病人。
讨论
柔膜细菌是一类无壁的细菌,包括支原体科和支原体属及脲原体。他们小于常规细菌,测量大约在0.3--0.8微米大小。支原体存在于各种动物(禽类、人类,哺乳动物,爬行动物),昆虫和植物。狗在出生时第一次接触和被支原体定居。支原体被认为是狗的粘膜正常微生物菌群的一部分,包括结膜、上呼吸道和泌尿生殖系统。30-50%的雄性和23-75%的雌性狗在生殖道存在支原体。然而,即使它们是正常菌群的一部分,支原体还是与疾病有关,包括尿路和肾感染(被认为是由于从较低的泌尿生殖道的上行感染)。在人类,有人建议,支原体负责5%的肾盂肾炎的病例。由于支原体生物通常定置在较低的泌尿生殖道,他们不应该在膀胱穿刺收集的尿液样本中被观察到。正常采集或废弃的尿液样本,可能污染细菌,但由于支原体的体积小,不会被常规尿液发现且在细胞学标本中可能被忽视(他们像细胞碎片或污渍沉淀)。有人建议,在通过膀胱穿刺收集的尿液和支原体时唯一的通过尿样培养分离出的微生物的这些情况下,被诊断为支原体感染的尿液应该被保存。这两个标准(膀胱穿刺,单独培养)在当前的案例中都完成了。
狗有15种支原体是已知物。两个额外的物种也已经从狗分离出,但没有被完全定下特征或姓名。支原体犬属M.cynos和M.haemocanis是最重要的物种,分别与泌尿生殖系统感染/不孕和呼吸道疾病及溶血性贫血相关。犬属小孢子菌被从的患泌尿生殖疾病和不孕的狗的前列腺、附睾、慢性炎症膀胱壁和子宫分离。与尿支原体感染相关的临床症状并不特定于这种生物,且可以从任何引起细菌性膀胱炎的病因看到。这些迹象包括血尿、多尿、烦渴、小便涩痛、尿失禁和腹痛。支原体应该被考虑为一个可能导致泌尿生殖疾病的病因在尽管抗生素治疗的情况下临床症状持续出现,,像本病例中看到的。由于其结构(无壁的细菌),支原体本质上是耐β-内酰胺抗生素的且拖延的β-内酰胺抗生素治疗会加剧感染.
在本案例中,支原体或脲原体感染的诊断借助了尿沉积物细胞学检查。如上所示,由于在较低的泌尿生殖道存在共生的细菌污染的可能性,如果通过一些其他方法收集的尿液样本将临床症状归因于感染时应该谨慎。在细胞学检查方面,这些微生物是小于大多数细菌且有多种外观从球菌样到可可杆菌到图章戒指。他们经常被观察到附着在上皮细胞,7促进他们的识别,但也可以在背景中或炎症细胞吞噬物中。他们很难从细胞碎片、染色的沉淀或非特异性胞质粒度区分(特别是在降解细胞)。他们不被革兰氏染色剂,5因此革兰氏染色剂不会对诊断有用(他们子啊革兰氏染色是红的但不是真正的革兰氏阴性)。主要鉴别诊断是犬布鲁氏菌感染,因为这些也是小的多种形状的球杆菌,革兰氏阴性,也与不孕症有关。观察到的上皮细胞的发育不良在本案例中是由于炎症引起的。然而,潜在的肿瘤,阻碍尿液流出或作为病灶感染也不能排除。超声检查缺乏膀胱肿块没有为潜在的肿瘤提供支持,但不排除原位癌。一旦适当的抗生素治疗使感染已经解决,建议重新评估尿液膀胱壁的上皮细胞。
支原体培养在实验室是很困难的,因为他们需要营养丰富的环境,对干燥和热高度敏感。阴性培养经常产生于常规血琼脂细菌培养,特殊的富集培养基应该被使用。已知的支原体的物种中,只有M.bovis和M.canis在血琼脂中生长。大多数犬类支原体(脲原体和其他支原体)快速增长在商用特定基质在有氧条37°C件下。一些也在厌氧条件下生长。这也许可以解释观察本案例中执行常规尿培养缺乏增长(说明涉及的物种没有犬小孢子菌),表明应该给诊断实验室一个特殊的对支原体的要求,如果怀疑感染了这种生物(从临床或细胞学的结果)。绝大多数犬类支原体有相同的煎鸡蛋形状菌落而且混合感染非常常见,因此生化和血清学试验对正确的支原体物种的识别是必要的。同时,对从狗最常被分离出来的微生物进行聚合酶链反应是可行的,但是这些分子测试并不经常使用。本案例中并没有做种别形成。
人们很少知道犬类支原体的毒力因子和致病性。诱发条件包括泌尿系肿瘤,泌尿系结石,长期抗生素治疗和引起阻塞或尿潴留的原因(允许感染提升)。尿液中的细菌数量不一定与临床疾病相关,因为比尿更多的病菌可能会出现在慢性增厚的尿膀胱壁。
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